两种基质胶对人脐带间充质干细胞生长的影响文献综述

 2023-02-20 07:02

本课题通过人脐带充质干细胞的倍增时间，特异性基因表达以及分化鉴定，比较三种基质胶对人脐带间充质干细胞的增殖的影响，目前复苏的细胞株系有umscs3.1和umscs2.1，并对p4至p6 的细胞进行流式实验，对p5和p6的细胞进行成骨成脂和成软骨的分化鉴定。

所用到的实验技术有：1流式细胞术：流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。

2 倍增时间的计算DT=t*[lg2/(lgNt-lgNo)](t为培养时间,No为首次记下的细胞数,Nt为t时间后的细胞数)3 人脐带间充质干细胞的分化培养技术1． 观察细胞：倒置显微镜下观察细胞形态，当细胞长满瓶底，确定细胞是否需要传代； 2． 上超净台：将试剂瓶、培养瓶等培养用具用75%的棉球或试纸擦试消毒，培养瓶盖子 口用 75%酒精棉球消毒； 3． 开盖：打开盖子，盖子侧立于（不要将盖口扣着放置） 酒精灯旁的架子上。

将培养细 胞的上清液体（旧培养基）倒入15mL离心管备用。

瓶口和盖子过酒精灯火焰后加盖； 4． 清洗死细胞：打开装移液管的盒子，用手捏住移液管（5mL）后部从盒子中拖出（注意 不要将管壁和管口碰到其他物品上），将移液管后端安上加液枪，过酒精灯火焰略烧管口和管壁以及手碰到的地方，酌情吸 2-3 mLPBS-EDTA 液，轻轻涮洗残留的旧培养基以及漂浮的死细胞，倒掉涮洗的残液；5． 胰酶消化：用移液管（再过一次火焰），加入2mL 胰酶，盖好瓶盖后，在倒置显微镜 下观察，当80%的细胞收回突起变圆时，立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶； 6． 中和消化：用移液管吸取旧培养基上清液，加入瓶中终止细胞消化，并反复轻轻吹打消 化好的细胞使其脱壁并分散；7． 沉淀细胞：将细胞悬液吸入15mL的离心管中，盖口。

按1000转/分钟， 8分钟离心； 8． 加新液：离心后倒掉上清液，保留细胞沉淀，注意只能倒一次，不能反复倒，然后用另 一新移液管 吸10mL的新鲜培养基加入培养瓶中5mL，另外5mL加入离心管吹打细胞沉淀使细胞悬浮，最后将离心管中的这5mL细胞悬液吸到培养瓶中，与另外5mL培养基混匀；9． 接种：将上述10mL细胞悬液吸取5mL到另一个新瓶中，接种后2个培养瓶中的悬液 各5mL；10．培养：盖上各瓶盖，拧紧，标记，放入常规的生化培养箱进行次代培养（如果放入CO2 培养箱，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2 气体的进入，再将培养瓶放回 CO2培养箱）； 11．每天观察细胞生长状况，并确定是否进行第2代的传代关于人脐带间充质干细胞的介绍：hUC被覆鳞状立方上皮细胞，称为脐带上皮，通常被认为来源于羊膜上皮：脐带的两条动脉和一条静脉被粘连组织华氏胶包被，该粘连组织是由特异的成纤维样的基质细胞和胞外基质构成。

这些成纤维样的基质细胞具有中等量的胞浆内糖原、脂质小滴和前胶原蛋白分泌颗粒，具有成熟的宽大的内质网、成熟的高尔基体和大量的线粒体，说明这些细胞具有活跃的蛋白质合成和分泌功能；另外，这些细胞具有脯氨酸羟化酶活性．该酶为胶原合成所必需。

因此，有学者推测．该基质细胞是胶原和胞外基质合成的主要细胞。

2003年，Mitchell等 首先证实了该类细胞具有多向分化潜能；随后有多位学者从脐带华氏胶中分离到这种成纤维样细胞，证实其具有自我更新、增殖和多向分化潜能，并命名为人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells．hUCMSC) hUCMSC 的一般生物学特性hUCMSC的细胞形态培养的24 h内即可观察到贴壁的成纤维样细胞，多呈梭形．也可见到多角形细胞 ：传代后的细胞为形态相对均一的梭形，呈平行排列或旋涡状排列生长。

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