开题报告内容:
一、 课题的意义和目的
课题意义:肝癌是世界上死亡率第三的癌症。肝炎病毒的感染,加上饮食上接触致癌原,都增加了发病率。肿瘤的发生、发展,与细胞凋亡与细胞增殖之间的失衡、细胞的迁移有着密切关系。与此同时,肿瘤细胞表面Toll样受体的表达也参与到肿瘤细胞逃逸免疫监视等过程中。灵芝被称为仙草,是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称。近年来,国内外学者对灵芝及其生殖细胞 灵芝孢子展开了广泛而深入的研究,灵芝抗肿瘤及免疫调节作用研究是当今研究的热点。研究证实,灵芝及灵芝孢子具有防癌抗癌、提高免疫、减低放化 疗毒性等作用。灵芝孢子的功效更强于灵芝子实体,孢子的药用价值引起了人们的广泛关注。灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中经二氧化碳超临界萃取出的脂质物质,主要含三萜类灵芝酸、油酸、亚油酸和微量元素等活性成分,具有降血脂、增强免疫力的作用,还能减轻化学性肝损伤。已有研究表明,灵芝孢子油不仅能抑制肿瘤生长、杀伤肿瘤细胞,还对免疫功能有一定的调节作用。已有资料表明不饱和脂肪酸具有抗氧化和改善脂质过氧化损伤的作用。本实验以 HepG2人肝癌细胞为靶细胞,对灵芝孢子油对肝癌细胞的影响及其机制进行初步研究。
课题目的:探究实验反应条件下灵芝孢子油对肝癌细胞HepG2的药效学作用,运用MTT法研究灵芝孢子油在体外对HepG2细胞的抑制作用。为进一步揭示灵芝孢子油的药用价值,并为今后将其开发为一种安全高效的天然保肝产品提供理论依据。
二、 研究手段
1.细胞培养HepG2细胞培养于DMEM养基中(含有10%胎牛血清),在37摄氏度5%CO2气体分压的细胞培养箱中培养。在生长到90%时使用胰酶消化的方式进行传代。定期冻存部分细胞。以上实验均在细胞对数生长期时进行。
2.MTT法测细胞毒性细胞计数与铺板组别设置与给药MTT处理与检测吸光度比较与分析
3.western blot检测纤维化相关蛋白表达灵芝孢子油模型蛋白提取与定量SDS-PAGE凝胶电泳转膜膜的封闭一抗孵育与洗涤二抗孵育与洗涤显影曝光条带数据处理分析。
三、 研究条件
理论条件:通过学校图书馆、互联网途径查阅相关的图书、报刊、杂志等,整合与课题相关资料;
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