RNA干扰HIF-1α基因在鼻咽癌细胞CNE-2中的研究文献综述

一、研究内容

1.设计三对针对HIF-1alpha;基因的siRNA

2.筛选能够沉默HIF-1alpha;基因的siRNA

3.通过下调HIF-1alpha;基因来研究其与下游基因VEGF的关系

二、实验路线

1.CNE-2的培养

使用含10%的胎牛血清的DMEM培养基进行培养，包括细胞复苏、传代等培养过程。

2. 缺氧干预及RNA干扰

取对数期的细胞以(2～5) 10⁵每孔接种至2ml DMEM培养液的6孔板中,置于5% CO₂、37 ℃空气培养箱中培养,待细胞培养至90%融合度时按要求分为常氧组、单纯缺氧组、反义寡核苷酸缺氧A、B、C 组(siRNA _{HIF- 1alpha;})和无义寡核苷酸缺氧组(siRNA^-_{HIF- 1alpha;}) ;弃除培养液,常氧组、单纯缺氧组:每孔加入2mL含10%胎牛血清的DMEM培养液; siRNA _{HIF- 1alpha;}及siRNA^-_{HIF- 1alpha;}缺氧组:根据细胞转染试Lipofectamine TM 2000的转染操作说明每孔分别加入500mu;L含反义寡核苷酸/无义寡核苷酸的转染复合物及1500mu;L无血清DMEM培养液;各组均置于5%CO₂、37 ℃空气培养箱中培养;培养6h后,siRNA _{HIF- 1alpha;}及siRNA-HIF- 1alpha;缺氧组更换含10%胎牛血清的DEME 2mL;转染24h后,单纯缺氧组、siRNA _{HIF- 1alpha;})及siRNA^-_{HIF- 1alpha;}缺氧组更换含化学缺氧诱导剂CoCl₂ 的DEME培养基2mL;继续置于5%CO₂、37 ℃空气培养箱中培养,24h及48h后分别进行RT- PCR检测及Western blot 检测。

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