磺胺耐药菌抗性基因的表达分析文献综述

 2023-01-31 11:01

磺胺耐药菌中抗性基因的表达分析课题性质 radic; 基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：一 拟研究或解决的问题1 磺胺类药物诱导病原菌中抗性基因的表达分析。

2 细菌在药物培养基中不同培养时间点菌体形态学和生理生化水平的变化。

3 磺胺类药物在培养基中的残留情况分析其与耐药基因表达的关系。

二 采用的研究手段1 细菌磺胺耐药性的诱导和培养1.1 细菌耐药性的诱导在实验室环境下，将Bacillus anthracis 和Shigella flexneri 敏感菌株平板培养在含磺胺类药物的试管中。

在37℃下，180rpm震荡培养过夜后，吸取0.5ml液体培养基，转接到LB液体培养基中，继续于37℃下振荡培养24h。

1.2 判断药物诱导抗性的最低浓度　　　按照上述方式不间断传代培养100次，根据试管中是否出现浑浊现象，判断药物诱导抗性的最低诱导浓度（以未出现细菌生长的上一级浓度为最低）。

2 抗性基因的表达分析2.1 分离RNA2.1.1 悬浮培养的细胞裂解匀浆　　　使用RNApro试剂分散细胞，促进核酸和蛋白的分离。

2.2.2除DNA和蛋白质　　　按照每1mlRNApro试剂加入0.2ml氯仿，离心将DNA，RNA，蛋白质分散在不同的介质中，RNA分布在上层水相。

2.2.3回收RNA　　　加入等体积异丙醇沉淀RNA，静止后离心，取沉淀物弃上清。

加75%的乙醇洗涤后用RNase-free水溶解。

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