课题背景：一直以来，阳离子聚合物作为有效的抗原输送载体，在DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗免疫中显示出佐剂效应。在前期研究中，我们发现作为药物输送载体的阳离子聚合物本身具有免疫刺激效应，能通过特异性地与巨噬细胞表面TLR-4结合，刺激IL-12的分泌，进而引起Th1分化。本课题拟就上述的体外细胞实验研究结果，进一步在体内研究阳离子聚合物对抗原特异性免疫反应的影响，确认是其是否具有佐剂效应。
拟研究和解决的问题：体内研究阳离子聚合物对抗原特异性免疫反应的影响，确认是其是否具有佐剂效应
研究目的和意义：本课题研究有利于进一步开发阳离子聚合物为高效低毒的、输送功能和免疫调节作用合二为一的新型佐剂系统。
研究内容：1.阳离子化的葡聚糖（C-dextran）的制备，将葡聚糖通过CDI活化，与乙二胺相连。一定量的葡聚糖加入100ml无水DMSO中，加热搅拌使其溶解，然后恢复至室温配成葡聚糖的DMSO溶液，再将一定量的CDI加入葡聚糖溶液中反应1小时活化葡聚糖的羟基，加入过量的乙二胺反应过夜，透析袋双蒸水透析，经透析反应体系形成胶状，透析2天，每天换水3次，再用0.1MNaHCO3D透析2天，每天换透析液3次，最后再用双蒸水透析2天，每天换水3次，冻干即得阳离子化的葡聚糖（C-dextran）
2.阳离子聚合物/卵清蛋白复合颗粒的制备和表征
用乳化法制备阳离子聚合物/卵清蛋白，以阳离子化的明胶（C-gelatin）为例，将阳离子化的明胶制成40%的水溶液，40℃水浴中溶解并保温10小时，吸出2ml加入到无菌烧杯中，加入卵清蛋白1-2ml，再加入已40℃水浴预热30分钟的橄榄油中，在40℃条件下搅拌使维持一定时间（或者用超声波乳化3分钟），然后在冰浴条件下继续搅拌5-8分钟，形成微球后，加入10ml异丙醇，继续搅拌5分钟，取出放室温置30分钟，吸出已析出油滴，用异丙醇再洗涤3-4次，直到在镜下看不到油滴为止，适量加入10%甲醛异丙醇固化过夜，去上清后，用小型冻干机干燥或者放37℃干燥。在保持无菌条件下配制成微球疫苗免疫动物。
3.动物免疫试验
6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠，皮下注射阳离子聚合物/OVA复合物，并以单独的OVA PBS溶液作为阴性对照，OVA和单磷酰脂质体A(monophosphoryl lipid A，MPLA)混合物作阳性对照。免疫2次，中间间隔2周。
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