生物样品中丙二醛的测定方法研究文献综述

 2022-12-26 05:12

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

生物样品通常是指植物的花、叶、茎、根、种子等，动物 (包括人)的体液 (如尿、血、唾液、胆汁、胃液、淋巴液及生物体的其他分泌液等)、毛发、肌肉和一些组织器官 (如胸腺、胰腺、肝、肺、脑、胃、肾等)以及各种微生物。在生物样品的测定中，根据测定项目的不同，首先要经过消解 （或灰化），或提取和分离等处理工作，然后才能进行待检组分含量的测定。处理生物样品的方法有消解法 （又称湿法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-过氧化氢消解法）、灰化法 （又称燃烧法或高温分解法）、提取法（包括振荡提取、组织捣碎、索氏提取器提取）、分离法和浓缩法。

本实验采用血浆来进行丙二醛的测定。环境生物污染测定中所用的血浆也是抗凝血浆。制备方法是将抗凝血在离心机中离心，使血细胞下沉，这样所得的上清液即为血浆。在血浆制备过程中应防止溶血，故要求采取血液时所用的注射器、针头等都需清洁干燥，取得全血后也要避免剧烈震动。有时须避免蛋白质的干扰 （常与试剂发生浑浊或沉淀），常用沉淀蛋白质的试剂除去血液中的蛋白质，而保留应测定的化学成分，这种操作称为无蛋白血液的制备。无蛋白血滤液的制备应根据具体检测要求来选择沉淀蛋白质的试剂。

丙二醛（MDA）是生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应的氧化终产物，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性，在体外影响线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性。MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标，可通过MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。医学研究表明，许多疾病与自由基和脂质过氧化密切相关，如动脉硬化、慢性胃炎、肾脏疾病、糖尿病、癌症和衰老等。测定血浆中丙二醛的含量课了解体内脂质过氧化程度，对于研究某些疾病或药物是一项有意义的指标。

然而MDA稳定性较差，而且生物样品中物质较多，对丙二醛直接测定干扰较多。目前国内外对生物样品中丙二醛的测定多采用紫外-可见分光光度法、荧光光谱法、高效液相色谱法、气质联用、酶联免疫吸附法及新型光谱检测法等。

传统方法是通过MDA与硫代巴比妥酸反应生成反应生成红棕色的三甲川（3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮），用紫外分光光度法测定在532nm的最大吸收波长。这种方法具有快速、简便的特点，应用较多，但是此法测定生物样品中丙二醛的含量，方法不够专属，一些脂质过氧化物的分解产物也参与反应，使得测定结果偏离。

查阅文献发现将MDA进行衍生化再通过高效液相色谱法测定能得到较好的测定结果。文献中采用罗丹明B肼作为衍生化试剂，预处理和衍生化后在酸介质50℃反应40分钟，用荧光检测器检测，能够得到较好的测定结果。

本课题的研究，参考该文献，打算先选取一个丙二醛的衍生化试剂，初步考察一下运用这个衍生化试剂能否得到较好的测定结果，若结果显示该反应是可行的，再根据结果考察一下运用怎样的色谱条件进行分离，选取一个较为合适的色谱条件再考察衍生化试剂和丙二醛的反应条件，如反应温度、反应比例、反应的PH环境、反应时间和反应溶剂等，采用控制变量法及平行实验原则，寻找出其最佳的反应条件。得到最佳的反应条件后，考察一下该反应得到的衍生化产物的稳定性如何。考虑到丙二醛具有两个醛基，不清楚反应是一个醛基反应还是两个醛基都反应，还有可能出现立体异构等情况，考虑是不是需要做一个还原实验。若需要进行还原，可能在还原的过程过出现其他的产物，无法得到一个单峰，则再需要进行各个还原条件的考察，期望通过调整还原的反应条件以得到想要的结果。

考察完反应条件与稳定性，再进行生物样品的处理研究。生物样品打算采用大鼠血浆，考察直接用血浆与衍生化试剂反应与将血浆进行处理后再反应对丙二醛的测定的影响，从而选取较好的测定方法。如果一切顺利，则进行方法学验证，再测定实际样品中的丙二醛含量。

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