他莫昔芬诱导的APOBEC3B蛋白表达的载体构建文献综述

 2023-01-09 06:01

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

背景介绍:

肝细胞性癌症(Hepatocellular carcinoma,HCC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,在很多地区,尤其是亚洲和非洲,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)被认为是感染HCC发生的一个高危因素,很多慢性HBV感染者最终发生严重的肝脏疾病,包括慢性肝炎,肝硬变和肝细胞癌,这些疾病目前每年导致约75万人死亡。

载脂蛋白B mRNA 编辑酶催化多肽样蛋白3(apolipoprotein B mRNA editing catalytic polypeptide like protein 3,APOBEC3)是哺乳动物所特有的胞嘧啶脱氨酶,目前已发现至少有七个成员:A3A 、A3B、A3C、A3D∕E、A3F、A3G和A3H。APOBEC3具有针对多种逆转录病毒和内源性逆转录元件的强大的天然免疫功能件的强大的天然免疫功能,但这种效应能被HIV-1病毒产生的病毒感染因子(Virion infectivity factor,Vif)所抑制。在病毒逆转录过程中,APOBEC3能使病毒负链DNA上的特定胞嘧啶碱基(C)脱去氨基转变成尿嘧啶碱基(U),这种突变能引起下列两种结果:(1)含有U的病毒负链DNA被激活的尿嘧啶DNA糖基化酶识别并移去U,产生无碱基位点,可抑制病毒正链DNA的合成或被细胞内的核酸内切酶所降解;(2)如果含有U的病毒负链逃避了尿嘧啶DNA糖基化酶的作用,则能作为模板合成正链DNA,从而使病毒正链DNA产生G→A超突变。这种超突变可产生成熟前终止密码子或高度突变的无功能病毒蛋白,从而抑制病毒的复制。APOBEC3的胞嘧啶脱氨基作用往往好发于逆转录病毒单链形式的负链DNA上。HBV基因组结构为一部分环状,一部分呈单链的双链DNA.在该病毒的生活周期中也需经历逆转录过程,期间也存在单链的形式。因此APOBEC3是否也能像逆转录病毒一样抑制HBV的负链DNA引起研究者兴趣。已经有研究证明,多个APOBEC3成员对HBV都有抑制作用,有些表达能被干扰素所诱导,提示它们可能参与了HBV的非溶细胞性清除机制。

APOBEC3B 蛋白是胞苷脱氨酶 APOBEC3 家族的一个重要成员,能够催化胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶,并因此具有抗逆转录病毒活性。APOBEC3B 同时也是一种逆转座子抑制剂,能够高效地抑制短散在重复元件 Alu 的逆转座活动。Alu 是一类哺乳类动物特有的逆转座子,长约 300 bp,在大约 6 千5 百万年前出现,经过漫长时间的逆转座扩增,占据了人类全部基因序列的 10%左右,有超过一百万份拷贝,是在内含子中呈高密度分布,被看作是最成功的转座因子。

选题意义:

APOBEC3B是一种强大的机体天然抗HBV分子,可能具有不同于A3G的独特的抗病毒机制,

它是胞苷脱氨酶APOBEC3家族的一个重要成员,能够催化胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶,并因此具有抗逆转录病毒活性。为进一步研究其生物活性机制,构建他莫昔芬诱导的APOBEC3B蛋白表达载体(PLVX-TRE3G-ZSGreen)。成功构建APOBEC3B蛋白表达载体系统可为进一步深入研究HBV和肝细胞性癌症奠定基础。

实验内容:

1.目的序列合成与设计

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