拟研究的问题 糖尿病是一种世界范围内的代谢性疾病,糖尿病伤口表现出容易感染、难以愈合的特点, 导致糖尿病足溃疡等严重并发症。
DL1503 是从丹参中提取得到的水溶性化合物,具有抑制炎 症反应、改善血管内皮细胞功能障碍和血管结构重塑等多重药理活性。
本课题从体内和体外两 方面共同确证 DL1503 对糖尿病伤口的促愈合作用,并初步探讨其作用机制。
研究方法 细胞实验: 1. 高糖对成纤维细胞增殖、迁移能力的影响 增殖能力检测:采用成纤维细胞(Nih-3T3),实验组培养基加入不同浓度葡萄糖,对照组 加入甘露醇,培养一定时间后,用 SRB 方法检测各组细胞数量,判断不同糖浓度对成纤维细胞 增殖能力的影响。
迁移能力检测:同样采用成纤维细胞进行划痕实验:在直径为 100mm 的培养皿中培养细胞, 待细胞达到 100%融合后,使用微量枪头在细胞生长的中央区域划出宽度一致的线性区域。
PBS 洗细胞 3 次,去除划下的细胞,实验组采用高糖无血清培养基培养 72 小时,对照组加入同体 积的正常无血清培养基处理相同时间,镜下观察不同组细胞对于划痕区域的修复能力和迁移能 力,判断高糖对成纤维细胞迁移能力的影响。
2. 药物(DL1503)对高糖条件下成纤维细胞的作用 经高糖处理的成纤维细胞,实验组采用不同浓度 DL1503 的培养,观察药物对高糖条件下成 纤维细胞的形态的影响、并对其增殖迁移能力和生长因子分泌能力进行检测。
(1)DL1503 对高糖条件下成纤维细胞形态、增殖迁移能力的影响 观察给药组和对照组成纤维细胞的形态,通过 SRB 方法检测各组细胞数量,检测成纤维细胞增 殖能力,迁移能力。
(2)DL1503 对高糖条件下成纤维细胞生长因子表达的影响 用 RT-qPCR 方法分别检测实验组和对照组细胞转化生长因子(TGF-beta;)、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)、成纤维细胞生长因子(FGF)和神经生长因子(NGF)的表达情况。
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