1.拟研究和解决的问题:本实验通过建立体内原位肺癌模型来研究黄芪提取物防治肺癌活性及机制,并且运用细胞固相化色谱来筛选黄芪防治肺癌的活性成分。
2.采用的研究手段:2.1 体内原位肺癌模型研究黄芪提取物防治肺癌活性及机制2.1.1 原位肺癌动物模型建立AJ小鼠30只随机分为5组,空白对照组,模型组,阳性药组(顺铂,10mg/kg/d),黄芪提取液高、低剂量组(5.2,2.6g/kg/d)。
除空白对照组,其余组别采用含苯并芘的玉米油100mg/kg,腹腔注射,每周2次,连续造模4周;空白对照组腹腔注射生理盐水。
阳性药组造模同时腹腔注射顺铂;黄芪提取液高、低剂量组造模同时灌胃给药。
第28w时摘除眼球采血,采血管不抗凝,置于4℃冰箱中静置2-3h后3000r/min,低温离心10min,取上层血清分装冻存于-20℃备用。
解剖小鼠,剖离肺组织,用4%的多聚甲醛固定后,用于HE 染色病理检测及免疫组化实验。
2.1.2 HE染色首先将在10%甲醛溶液中浸泡48h的肺组织切片在60oC恒温箱中烘烤60分钟使组织固定,然后用二甲苯将切片浸泡10分钟,更换溶剂后继续浸泡10分钟。
接着分别用梯度乙醇浸泡5分钟。
滴加苏木素100ul,染色过程持续10分钟后,用1%的盐酸酒精分化,并加促蓝液返蓝。
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