开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、及文献综述,不少于2000字)
一、拟研究或解决的问题
通过一系列检测方法对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)衍生多肽产物进行鉴定。
二、采用的研究手段
本课题利用基因重组技术,通过设计新型GLP-1衍生多肽的基因序列,并选用大肠杆菌偏爱密码子,构建重组质粒,并将其定向插入到高效表达载体中,用大肠杆菌进行表达,经工程菌发酵培养,对发酵产生的融合蛋白用亲和层析柱纯化后,经肠激酶切割生成的目标肽,并对发酵产生的融合蛋白和肠激酶酶切产生的目标肽进行鉴定:
1、 SDS-PAGE电泳
融合蛋白经SDS-PAGE电泳与杂蛋白分离,融合蛋白条带的分子量在25kD-37kD之间。
2、 Western-blot免疫印迹法鉴定
肠激酶酶切后的样品经过SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离,得到含有目标肽段的条带,并将其转移到固相载体(PVDF膜)上,以目标肽段作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,经过底物显色以检测特异性目的肽的存在。
3、 高效液相色谱法(HPLC)检测
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