一、本课题研究内容本课题拟研究慢病毒载体构建的方法以及应用现状，通过查阅相关文献，熟悉慢病毒载体在医学研究方面的应用，探讨研究并建立一种慢病毒载体构建的方法。
二、本课题研究目的及意义近年来随着的工作压力的增大，越来越多的人受到了脱发的困扰。
这也促使了脱发治疗相关技术的的蓬勃发展。
通过研究发现，大多数成年男性秃头数量占到了较大比例，经过升入研究后发现，这与男性性激素睾酮分泌量有着密切的联系，而本实验旨在通过性激素作用位点后触发的三个特异性基因转导来研究所作假说是否成立。
通过对PCR技术对基因片段进行复制后，通过与相应酶切位点的质粒（即慢病毒载体）进行接合从而实现基因表达检测的一种方法。
三、慢病毒载体构建原理与方法慢病毒载体的选择：pLVX-IRES-ZsGreen1。
基因选择：Tmprsss2；PSA；HK2.通过研究发现，秃头病因构成可能与人体类上述三个基因的表达有关，我们通过选择上述慢病毒载体，将三个目的基因与引物结合后通过PCR扩增后得到一定浓度的DNA片段，并在合适的条件下与处理后的慢病毒载体即质粒结合后植入小鼠体内表达，通过观察小鼠毛发生长状况从而得出数据并记录实验结果。
pLVX-IRES-ZsGreen1表达载体的构建与鉴定：将实验所用质粒用 ＳｐｅⅠ、ＢａｍＨⅠ 酶切处理后，用 ＳｐｅⅠ、ＢａｍＨ Ⅰ将 ＭＩＡ２的 ＰＣＲ片段及目的载体 ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－ＺｓGｒｅｅｎ１双酶切，然后进行连接，取１０mu;Ｌ进行１％琼脂糖凝胶电 泳，再切胶回收目的片段，挑取克隆，提质粒，进行鉴定，ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－ ＺｓＧｒｅｅｎ１－ＭＩＡ２构建成功。
将酶切鉴定正确的ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－ ＺｓＧｒｅｅｎ１－ＭＩＡ２送去测序。
用实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨｅｐＧ２细胞中ＭＩＡ２的表达情况，ＭＴＴ法检测细胞增殖的情况[1]，将成功构建并且通过验证的酶切质粒与上述Tmprsss2；PSA；HK2三个基因进行同源重组后，用荧光检测仪检测成功接合的目标质粒，从而得到实验所用的质粒样本四、慢病毒载体在医学方面的应用１.基因辅助表达与疾病治疗作用目前我们对于慢病毒载体的运用与研究发迅速的展，为我们的有关疾病的研究带来的极大的便利，由于慢病毒本身自有的特性，慢病毒携带的基因组可高效率的整合到宿主基因组，使宿主细胞长时间稳定表达随载体植入的外源基因，并且由于慢病毒载体（Lentivirus）是一类由人免疫缺陷病毒（HIV）改造而成的病毒载体，属于逆转录病毒的一类，由RNA构成，并且其中所蕴含的毒性基因会在使用前被剔除并被外源性目的基因所取代，也被称作假型病毒。
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