开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一：选题的背景及意义
人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell-surface antigen 2, TROP2)，又称肿瘤相关钙离子信号转导子2（TACSTD2），定位于人的 1p32染色体上，为无内含子的基因[1],与细胞内钙离子浓度的调控有关[2]。关于TROP2蛋白的研究证实，TROP2 在甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌等多种肿瘤组织上高表达，而在正常上皮或组织中低表达或不表达[3][4][5][6][7]。TROP2已被鉴定为癌基因，可促进肿瘤细胞增殖、侵袭、转移[8]。TROP2的表达与缩短肿瘤患者生存期密切相关，可以作为不良预后的标志[9]。敲除TROP2基因，肿瘤的增殖和迁移受到明显抑制，并且可以促进细胞凋亡；而过表达TROP2基因，则起到相反的作用[10]。通过定量实时聚合酶链反应（qPCR）和流式细胞仪分析来比较人正常的卵巢细胞系和上皮性卵巢癌（EOC）中TROP2 mRNA和蛋白表达量，运用免疫组织化学法检测上皮性卵巢癌、正常卵巢组织和正常输卵管组织中TROP2蛋白表达水平。肿瘤样本中有58.6%过表达了TROP2蛋白。经Cox回归分析TROP2表达与患者临床病理特征，发现TROP2过表达与显著缩短总生存期和无病生存期相关，提示TROP2是上皮性卵巢癌（EOC）的独立预后标志物[11]。通过免疫组织化学的方法，在胃癌、胆囊癌、宫颈癌等中发现TROP2在肿瘤组织中的表达高于癌旁组织，并且与肿瘤分期、淋巴结转移程度、肿瘤大小、组织分化程度有关，TROP2基因的表达可显著缩短患者的总生存期，可成为胃癌、胆囊癌、宫颈癌等预后标志物和肿瘤靶点[12][13][14]。在甲状腺癌、前列腺癌等癌症中发现，这些癌组织高表达TROP2可以减少粘附细胞的粘附作用，促进相关肿瘤细胞的转移和扩散[15][16]。Sun等人发现TROP2基因沉默，可以抑制子宫内膜癌的上皮间质转化（EMT），强烈的抑制细胞的增殖和迁移，并促进细胞凋亡[17]。
Anthony等人发现TROP2是一种高敏感性和特异性的免疫组织化学标记物，可用于识别经典的甲状腺乳头状癌及其变体（滤泡性病变，良性甲状腺结节等），有助于对不确定的甲状腺细胞穿刺肿瘤结果进行风险分层评估，减少不必要的甲状腺手术，同时可靠地识别恶性病变[18]。
抗体偶联药物（ADC）药物，由于它既具有抗体靶向性作用，定向地将毒物富集在肿瘤部位，又可以发挥小分子毒物的杀伤作用，相对毒副作用低、疗效好，因此是目前靶向疗法研究的热点。只有肿瘤组织高表达TROP2抗原，患者才能对靶向该分子的ADC药物做出响应。因此，筛选出适用于免疫组化研究的TROP2抗体，开发出免疫组化检测试剂盒，通过检测患者肿瘤组织上TROP2抗原的表达，可以帮助临床医生根据靶点的表达水平对病人进行分类筛选，进而指导医生是否使用靶向TROP2的ADC药物，做到对症下药。其次，目前ADC药物具有抗体的靶向毒性问题。理想的抗体靶点只在肿瘤细胞上表达，在正常细胞上不表达。但实际上，几乎所有的蛋白质靶点都会在正常组织上表达，这会使ADC药物杀伤正常的细胞。ADC药物的毒副作用与剂量有关，在临床研发前都要进行ADC药物的最大耐受剂量实验。根据靶点的表达量与治疗效果的相关性，可以指导医生调整给药剂量，减少毒副作用。筛选出适用于免疫组化研究的TROP2抗体，开发出免疫组化检测试剂盒，可以检测靶点的表达水平，调整给药剂量，实现精准化治疗。
本研究旨在制备出特异性强、结合能力好、可用于石蜡包埋组织切片免疫组化实验的TROP2抗体，为后期靶向药物的精准治疗提供实验室基础。
二：国内外研究现状
- TROP2介导的肿瘤发生发展的机制
尽管已经有很多文献表明TROP2与肿瘤的增殖、迁移有关，但目前对TROP2介导的肿瘤发生发展的机制还不是很明确。早期，科学家就发现TROP2能介导细胞质内Ca2 浓度增加。TROP2 蛋白胞质区有一个丝氨酸残基303（S303）位点，当它被蛋白激酶C（PKC）磷酸化后，促进 4,5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）水解成为三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DAG）。三磷酸肌醇（IP3）结合内质网表面 IP3 受体，促进内质网中储存Ca2 的释放，激活丝裂原活化蛋白激酶途径（MAPK），促进细胞周期进程；而二酰基甘油（DAG）可进一步激活蛋白激酶C（PKC），从而调节TROP2更多磷酸化[19]。
TROP2介导常见的肿瘤信号通路，影响细胞周期蛋白的表达。Li等人发现，通过调控PI3K/AKT通路和诱导上皮间质转化（EMT），上皮细胞丧失细胞极性，破坏细胞间的连接，从而促进了胆囊癌细胞的增殖、迁移和转移[20]。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是一种高度保守的细胞内通路，在向细胞核传递信号中发挥重要作用。Wang等人在喉癌细胞中敲除TROP2基因，ERK/MAPK信号通路和细胞周期蛋白D1被抑制，细胞活力、迁移和侵袭性都下降，证明TROP2基因介导ERK/MAPK信号通路[21]。Guan等人在被TROP2敲除的甲状腺癌细胞中发现ERK1/2和JNK的磷酸化水平显著降低，在被TROP2转导的细胞中观察到ERK1/2和JNK的磷酸化增加。表明MAPK /ERK和JNK信号参与了TROP2相关信号的转导[14]。
除了在蛋白质水平进行信号转导外，TROP2 mRNA和周期蛋白1 mRNA通过分子间剪切形成双顺反子周期蛋白1-TROP2，可以改变细胞周期蛋白D1的表达。周期蛋白1-TROP2嵌合基因可以导致细胞周期的改变，导致细胞生长失控，对细胞凋亡产生抗性[22]。
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