开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景与意义
CD24在许多癌症中过度表达，并表现为致癌性。在适应性免疫反应中，CD24在富含共刺激的淋巴器官中是一种多余的共刺激分子。CD24被鉴定为原发性肝癌中的肿瘤干细胞标志物，其表达与癌细胞的发展、侵袭和转移有关。许多癌症中CD24的表达显著高于癌前病变，且最新研究表明CD24与巨噬细胞上的抑制性受体Siglec-10相关作用，促进肿瘤逃逸。因此，CD24是一个很有潜力的靶点。
T细胞双特异性抗体（BsAbs）在目前肿瘤治疗领域中较有前途的部分。BsAbs能够诱导T淋巴细胞与肿瘤细胞结合，使T细胞释放穿孔素或颗粒酶，将靶细胞降解。除此之外，双特异性抗体还能向肿瘤传递有效载荷，阻断对肿瘤重要的信号传导。基于CD3设计的双特异性抗体能够绕过传统TCR与HLA识别的限制，抗体能同时结合T细胞上的CD3和肿瘤细胞上的TAA，从而激活T细胞，使其对肿瘤造成杀伤。CD3双特异性抗体已经重新吸引了广泛的兴趣，并且各种T细胞双特异性抗体形式正在临床前和临床开发中。
通过双特异性抗体同时靶向CD3和CD24，可以将表达CD24的肿瘤细胞和T细胞空间上拉近，形成空间距离较近的免疫突触结构，激活T细胞对肿瘤细胞的杀伤，与此同时，由于对于CD24- Siglec-10信号的阻断，理论上还可能增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。
- 实验内容与研究手段
本次毕业设计的实验部分分为两部分，第一部分为CD3和CD24的双特异性抗体的构建，第二部分则为该双特异性抗体的表达及鉴定。
在第一部分构建中，CD24的嵌合抗体cG7由本实验室前期开发，CD3抗体序列则来自本领域公知的克隆。抗体构建过程中可能涉及到的抗体组装技术有“Knob into hole”，“CrossMab”。涉及到的分子生物学实验技术有PCR，酶切酶连，转化，琼脂糖凝胶电泳等。
在第二部分表达及鉴定中，将构建并测序好的质粒转染至真核细胞Hek293中，细胞培养一段时间后收集上清液，并对其进行纯化和分子量鉴定。涉及到的实验技术有转染，细胞培养，亲和层析，SDS-PAGE，Western Blot等。
三、文献综述
1 双特异性抗体
分子靶向疗法是癌症疗法中最有前途的领域之一。肿瘤靶向治疗的成功取决于靶向抗原，靶向抗原必须是癌细胞特异性且合理表达的。针对肿瘤细胞表面的特异性分子设计药物，可以特异性地靶向肿瘤细胞，对其造成有效杀伤。如今已经有许多药物上市，如针对抗EGFR的西妥昔单抗，抗CD20的利妥昔单抗，小分子靶向药物伊马替尼等。抗体药物如今在医疗领域占有越来越重要的地位，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了83种抗体，其中34种已注册用于治疗癌症患者 [1]。如今，人们已经开发出结构越来越复杂的抗体，如抗体偶连药物和双特异性抗体。
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