开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究的目的及意义
几乎所有的生物体都使用着同一套遗传密码子，其中包括61种有意义密码子和3种终止密码。这61种有意义密码子分别编码着20种天然的氨基酸,由这20种天然氨基酸所编码的蛋白质参与了大部分的生命活动，如光化学反应，转录，翻译等。但这并不能完全满足生命活动的需要，生物体经常通过翻译后修饰、辅酶结合等方式在含20种天然氨基酸蛋白质上添加一些新的化学基团去扩展蛋白质的功能，如吡哆醛、金属离子、甲基、糖基和磷酸基等。甚至一些古细菌和真菌能直接编码第21种和第22种编码蛋白质的氨基酸-硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸[1]。这一现象说明一些未进化完全的核糖体蛋白装配系统可以允许除20种天然氨基酸以外的非天然氨基酸引入蛋白质中。
因此，如果能通过生物体的核糖体蛋白装配系统随心所欲地在任意蛋白质内部定点引入适当的非天然氨基酸，这不仅能改变蛋白质的结构和构象，增强其生物功能和抗蛋白酶降解能力，提高生物利用度及与受体的亲和力；还能通过在蛋白中引入生物物理探针来探测蛋白在细胞内外的结构和功能信息等；甚至还有可能通过非天然氨基酸引入进化出新的分子和组织。
建立一种能在蛋白质中定点引入D型氨基酸的方法，将为探讨氨基酸手性在蛋白质的结构和功能之间的作用和探讨老年性疾病的发病机制和相关蛋白残基消旋化之间的关系等热点研究领域提供重要的手段。
二、研究的主要内容
1.表达菌株和载体构建
1.1 pAC-phDelta;-AK3 已经由刘智志博士构建完成。通过PCR定点突变技术，将pACYC184质粒上氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因第112位天冬氨酸密码子突变为琥珀密码子 TAG。GlnRS启动子与终止子插入到 pAC-TAG 载体。截短的Ph LysRS插入到pAC-TAG-PT载体。抑制型tRNALys基因插入到pAC-phDelta; 载体。
1.2 pETDuet-DKR114TAG是本课题新构建的载体
在pETDuet载体的两个多克隆位点分别引入含琥珀密码子的DKR 基因和含Ph赖氨酰tRNA合成酶基因。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
